Em relação aos aspectos gerais dos biofármacos (proteínas terapêuticas), analise as afirmativas a seguir.

I. Entre os fatores que afetam a imunogenicidade das proteínas terapêuticas pode-se citar: glicosilação, pureza, sequência de aminoácidos, excipientes e estabilidade.

II. A imunogenicidade de uma proteína terapêutica é independente da formulação e da via de administração.

III. A complexidade das proteínas terapêuticas pode ser definida por comparabilidade ou similaridade frente a um produto de referência.

Assinale:

As endonucleases de restrição são proteínas de grande importância dentro da tecnologia do ADN recombinante, sendo fundamentais, por exemplo, na análise da estrutura dos cromossomos, seqüenciamento de longas moléculas de ADN, isolamento de genes e na criação de novas moléculas de ADN que podem ser posteriormente clonadas em distintos tipos de vetores. Em relação ao tema, analise as afirmativas a seguir.

I. Um pedaço de ADN, produzido pela ação de uma enzima de restrição, também pode ser clivado especificamente em fragmentos menores por ação de outra enzima de restrição.

II. A maioria das enzimas de restrição reconhece sequências de dois a seis pares de bases e hidrolizam uma ligação fosfodiéster na fita de ADN, a exemplo da Pst I que é um palíndromo.

III. As enzimas de restrição são amplamente encontradas em uma grande variedade de procariotos. Sua função básica é reconhecer uma sequência de bases específica na fita simples de ADN em lugares determinados, fazendo cortes no eixo de simetria abruptos ou cortes assimétricos coesivos.

Assinale:

Em relação ao cultivo de células transfectadas em biorreatores, analise as afirmativas a seguir.

I. O emprego da tecnologia de cultura de células em microcarregadores permite o aumento da capacidade de produção das moléculas terapêuticas, devido à razão extremamente alta entre a área da superfície e o volume disposto pelos microcarregadores. Muito empregado para as culturas de adesão.

II. Os materiais usados para fabricação dos microcarregadores são de natureza porosa. Dependendo da dimensão dos poros, eles são classificados em microporosos e macroporosos.

III. Os microcarregadores microporosos consistem de partículas com dimensões de 0,4 a 5 mm com cavidades internas que permitem a adesão e o crescimento das células em seu interior. Este tipo de microcarregador foi desenvolvido com a finalidade de permitir o crescimento das células de forma tridimensional de modo a atingir altas concentrações.

Assinale:

Na literatura estão descritos, diferentes meios definidos adequados a um cultivo para produção de altas densidades celulares, para E. coli recombinante. Em relação ao tema analise as afirmativas a seguir.

I. A composição de um meio de cultura muda durante o crescimento ocorre depleções de nutrientes, mudanças na osmolaridade e secreção de metabólitos pelo microrganismo, podendo em alguns casos, serem identificadas certas mudanças na morfologia (fenotípica) e na atividade metabólica.

II. Determinadas cepas de E. coli (K-12 e derivadas) são capazes de utilizar sacarose como fonte de carbono, viabilizando a produção de biomassa em meios industriais.

III. Para atingirem-se altas concentrações celulares de E. coli recombinante é necessário o fornecimento de uma quantidade elevada de fonte de carbono (glicose) e um balanço adequado de nitrogênio e fósforo.

Assinale:

As culturas de células animais podem ser classificadas de acordo com sua origem e biologia em: culturas primárias e linhagens celulares. Sobre o tema, analise as afirmativas a seguir.

I. São denominadas linhagens celulares finitas, as células capazes de um número limitado de duplicações, após o qual a proliferação cessa e linhagens celulares contínuas aquelas a serem propagadas e expandidas.

II. As linhagens celulares imortalizadas podem ocorrer espontaneamente (sendo um acontecimento raro) ou após transformação, que pode ser induzida por agentes químicos carcinogênicos, por introdução no genoma da célula de um gene viral ou um oncogene capaz de ultrapassar a senescência ou ainda recorrendo à infecção com vírus.

III. As células diplóides têm características de senescência e acabam por morrer em cultura após um número definido de gerações. A grande desvantagem deste tipo de células é que elas apresentam crescimento lento, não atingem altas densidades celulares, têm produtividade relativamente baixa e são altamente dependentes de adesão em suportes para o crescimento.

Assinale:

Os cultivos celulares são considerados, na literatura em geral, como processos aeróbicos. Assim sendo, o oxigênio deve estar disponível em níveis adequados para garantir a produção de energia para a célula. Em relação ao tema, analise as afirmativas a seguir.

I. Altas concentrações de oxigênio podem permitir a formação de radicais livres e induzir toxicidade. Uma faixa ótima de saturação de ar seria entre 10 a 15%.

II. Adição de agentes como β-mercaptoetanol protegem as células dos radicais livres e diminuem a toxicidade dos radicais livres.

III. O controle preciso da temperatura de cultivo celular é fundamental para as linhagens celulares. No caso das linhagens de mamífero, temperaturas acima de 40 °C induzem na maioria das vezes a morte celular.

Assinale:

A biotecnologia ocupa uma posição cada vez mais importante na produção de medicamentos, em geral inovadores e relevantes no tratamento de doenças críticas. Estes medicamentos são chamados também de biofármacos (proteínas terapêuticas). Em relação ao tema analise as afirmativas a seguir:

I. Se as proteínas terapêuticas não forem bem caracterizadas quanto a sua estabilidade, podem ser degradadas e gerarem reações imunogênicas de alto impacto na sua efetividade como eventos adversos.

II. O tamanho da estrutura molecular das proteínas terapêuticas é da ordem de 100 vezes maior que a estrutura de uma molécula química. O tamanho e a complexidade da estrutura destas proteínas conferem características tridimensionais relevantes para a sua atividade biológica.

III. O princípio ativo de uma proteína terapêutica é fortemente dependente do processo de purificação. Assume-se que pequenas mudanças na conformação de uma proteína amplamente conhecida (insulina), oriundas do processo de purificação, não afetam sua antigenicidade e consequentemente sua imunogenicidade.

Assinale:

Em relação aos aspectos gerais de cultura de células primárias e linhagens celulares, analise as afirmativas a seguir.

I. As culturas celulares apresentam freqüentemente muitas propriedades diferenciadas: fibroblastos continuam a secretar colágeno; células derivadas de músculo esquelético embrionário fusionam-se para formar fibras musculares gigantes, que contraem espontaneamente na placa de cultura; células nervosas lançam axônios que são eletricamente excitáveis e fazem sinapse com outra célula nervosa; e células epiteliais formam extensivas lâminas com muitas das propriedades de um epitélio intacto.

II. A otimização de meios de cultivo para as culturas celulares tem sido um desafio para o setor industrial. Meios sem soro e meios quimicamente definidos são alvos de pesquisas. Os meios definidos contêm uma ou mais proteínas específicas as quais a maioria das células necessita para sobreviver e proliferar em cultura. Estas atuam como fatores de crescimento, estimulando a proliferação celular e outras funções como, por exemplo, a transferina, que transporta cálcio e potássio para dentro das células através de canais apropriados.

III. Meios quimicamente definidos sem soro tem facilitado a sobrevivência, desenvolvimento e proliferação de tipos específicos de células, como por exemplo, as utilizadas para a produção de moléculas sinalizadoras protéicas extracelulares.

Assinale:

O sistema de expressão heterólogo em E. coli é um método muito empregado para a produção de insumos biotecnológicos seu sucesso depende de muitos fatores: como o vetor de expressão e a sua estabilidade, o uso de promotores fortes, condições de cultivo e principalmente dos métodos disponíveis para a purificação da proteína recombinante expressa. Em relação ao tema, analise as afirmativas a seguir.

I. Os plasmídeos são encontrados em procariotos e possuem genes essenciais a sobrevivência, manutenção e reprodução bacterianas, porém podem conferir vantagens seletivas ao hospedeiro, como resistência a antibióticos, metais pesados, produção de substâncias antibióticas, degradação de compostos aromáticos, imunidade a bacteriófagos, entre outros.

II. Os plasmídeos Col têm sido os mais estudados até o momento, não só porque dirigem a produção de colicina, mas pelo seu grande potencial, como base para construção de vetores de clonagem e expressão.

III. A incompatibilidade plasmidial é uma propriedade utilizada para determinar o grau de proximidade entre os vários plasmídeos existentes. Incompatibilidade é a inabilidade de dois plasmídeos co-residentes serem estavelmente mantidos na mesma célula, na ausência de seleção externa.

Assinale: