Compostos desconhecidos podem ser identificados por seus espectros característicos ao ultravioleta, visível ou do infravermelho.

Para realizar a quantificação de DNA (ácido desoxirribonucleico) por espectrofotometria faz-se a medição da quantidade de luz absorvida pelo DNA em solução no comprimento de onda de 260 ηm, sendo que quanto maior for a absorção de luz nesse comprimento de onda, maior a concentração de DNA na solução.

Este método físico é indicado para se determinar a concentração de solutos normalmente corados como também incolores, mas passíveis de adquirir cor mediante o emprego ajustado de certos reativos.

Reações enzimáticas podem ser frequentemente seguidas medindo-se espectrofotometricamente o aparecimento de um substrato ou desparecimento de um produto.

As concentrações de soluções de compostos conhecidos podem ser determinadas medindo-se a absorção em um ou mais comprimentos de onda.