Para a realização de uma reação de imunofluorescência indireta iniciou-se com a diluição do conjugado. Foram utilizados três tubos, cada um com 100 microlitros de diluente. No primeiro tubo, foram adicionados 100 microlitros de conjugado pronto para uso. A solução foi cuidadosamente homogeneizada em cada etapa, transferindo-se 100 microlitros do primeiro para o segundo tubo, e do segundo para o terceiro tubo. Em seguida, em outro procedimento para a diluição da amostra do paciente, foi utilizada 0,01 mL de soro em 0,39 mL de diluente. A partir dessa diluição, foram transferidos 50 microlitros para um segundo tubo, contendo 0,35 mL de diluente.