É um método de detecção de vírus não sendo, portanto, aplicável na detecção de proteínas em geral.

É um método de detecção fluorescente, sendo necessária a existência de um leitor de fluorescência de alta sensibilidade, sem o qual não é possível avaliar o nível de proteínas presentes na amostra.

É um método que necessita obrigatoriamente da presença de um anticorpo de alta especificidade e alta afinidade pelo antígeno que está sendo detectado e que, desta forma, exige a existência de anticorpos monoclonais para o antígeno em questão.

É um método de carácter qualitativo, sendo usado apenas para a detecção da presença ou da ausência de uma determinada proteína, mas que não pode ser aplicado em situações onde se quer detectar o nível absoluto de proteína.

É um método que depende da conformação da proteína que se deseja quantificar e, assim, é sensível à variações de pH, temperatura e força iônica na amostra que esta sendo avaliada.