O DNA complementar (cDNA) pode ser utilizado como DNA doador, sendo derivado de sequências genômicas cortadas com enzimas de restrição.

As diversas enzimas de restrição existentes são extraídas de bactérias, sendo que todas elas geram pontas adesivas unifilamentares, o que facilita a recombinação das moléculas de DNA doadora e receptora.

Fragmentos do DNA doador do gene de interesse podem ser inseridos em vetores, como os plasmídeos e os vírus, que, além de carregarem, também amplificam o gene de interesse.

A ligação covalente, que une os arcabouços açúcar-fosfato dos nucleotídeos, é feita pela adição da enzima DNA polimerase ao meio, que cria ligações fosfodiéster nas junções de DNA.