esta técnica permite somente a separação de amostras bacterianas em Gram positivas.

o corante cristal violeta pode ser substituído, com os mesmos resultados, pela safranina.

as bactérias Gram positivas e Gram negativas absorvem de maneira idêntica o corante primário e o fixador.

as bactérias Gram positivas não retêm o cristal violeta, após o tratamento com etanol-acetona.

o corante fucsina básica pode ser substituído com os mesmos resultados pelo azul de metileno.