No método ELISA de bloqueio um antígeno é aderido a um suporte sólido e então se coloca os soros em teste, para busca de anticorpos contra o antígeno. A formação da ligação antígeno-anticorpo é detectada pela adição de um segundo anticorpo.

ELISA indireto se baseia na presença de anticorpos em determinado soro ser revelada pela competição com um anticorpo específico (mono ou policlonal) dirigido contra o antígeno. Igualmente, o resultado é dado pela adição de um conjugado, porém a coloração aparecerá nos orifícios onde não havia anticorpos.

Uma das principais vantagens do método de ELISA direto está na variedade de anticorpos secundários com diferentes marcadores estão disponíveis para venda.

As enzimas comumente utilizadas são a peroxidase HRP (do inglês, horseradish peroxidase) e alcalina fosfatase (AP).