Os frascos contendo discos de antimicrobianos a serem utilizados para realização dos antibiogramas pelo método de difusão em ágar devem ficar armazenados à temperatura ambiente (19 ºC a 30 ºC).

Após a semeadura da suspensão bacteriana em meio de cultura, um dos cuidados na execução do antibiograma é a espera de 30 a 60 minutos para aplicação dos antibióticos selecionados.

Em placas de petri de 150 mm de diâmetro, devem ser colocados 24 discos de antibióticos, sendo que a distância mínima entre os antimicrobianos deve ser de 5 mm (centro a centro).

Após preparação, o meio de Mueller Hinton deve permanecer sob refrigeração (2 ºC a 8 ºC), com prazo de expiração que varia de 6 a 8 meses, devendo ser colocado em estufa a 56 ºC por 30 minutos antes de sua utilização.