Os testes de toxicidade aguda deverão ser feitos em três doses, em duas espécies de animais diferentes. Duas semanas a 3 meses de testes podem ser necessários antes dos ensaios clínicos.

A avaliação da toxicidade crônica deve ser realizada em roedores e coelhos para todos os fármacos que serão utilizados por períodos prolongados. É importante observar os efeitos desses testes sobre o comportamento de acasalamento dos animais.

O teste de potencial carcinogênico deverá ser feito em dois anos, duas espécies diferentes, sendo necessário quando se pretende usar o fármaco por períodos longos.

O teste de toxicidade subaguda ou subcrônica deverá ser feita em roedores, sendo necessário determinar a dose subaguda letal em aproximadamente 70% dos animais.

Para o teste de potencial mutagênico, deve-se testar os efeitos sobre estabilidade genética e mutações em bactérias, em espécies de roedor e pelo menos um não roedor por ≥ 6 meses.