O método tintorial predominante utilizado em bacteriologia é o método de Gram. A coloração de Gram recebeu este nome em homenagem a seu descobridor, o médico dinamarquês Hans Cristian Joaquim Gram. Após descrição do método, inúmeras propostas de modificação foram feitas. Das alternativas apresentadas abaixo em relação as modificações feitas ao longo do tempo em relação ao método de Gram, assinale a alternativa CORRETA.

I. O método original utiliza violeta-de-genciana. Atualmente esse corante foi substituído por outro tipo de cristal violeta, a violeta-de- metila.

II. A solução de violeta-de-metila, em sua preparação, já contém fixador químico. Devido a isso, a fixação do esfregaço em chama caiu em desuso e é atualmente contraindicada.

III. Usa apenas o álcool etílico (99,5º Gay-Lussac), pois é mais seguro do que o álcool - acetona utilizado, pois requeria grande habilidade do operador para que não ocorresse a hiperdescoloração.

IV. A fucsina fenicada de Gram foi substituída pela safranina. Foi baseado no espectro de cores que substituiu a fucsina pela safranina.