a técnica de PCR em tempo real detecta a amplificação do fragmento de DNA de interesse a partir da fluorescência emitida quando fluoróforos, como o Sybergreen, se intercalam na dupla-fita do amplicon, o que torna essa técnica mais específica que o PCR convencional.

o perfil térmico dos produtos finais da amplificação por essa técnica, observados pela curva de dissociação chamada “melting curve”, revela a especificidade da reação, identificando ou não a presença de produtos amplificados inespecificamente.

apesar de sua elevada sensibilidade, a técnica de PCR em tempo real não detecta homo ou heterodímeros de oligonucleotídeos iniciadores, formados ao longo da reação, o que configura uma vantagem dessa técnica.

por causa de sua alta eficiência, a curva de amplificação do DNA de interesse apresenta somente duas fases: a de amplificação linear e a do platô, que é alcançado quando os substratos da reação se esgotam.

o método de detecção dos produtos da reação de amplificação a partir do uso do fluoróforo Sybergreen é muito utilizado para amplificação de cDNAs (DNA complementares). Entretanto, não pode ser usado para amplificar regiões de DNA genômico devido ao grande tamanho do DNA-molde.