A técnica de PCR chega a produzir 250 milhões de cópias de determinada região de uma molécula de DNA, o que pode equivaler a multiplicar alguns nanogramas, ou menos, de DNA em microgramas. Sobre esse assunto, analise os seguintes passos:

I Fragmentação de células ou tecidos em solução tampão, seguida de realização de eletroforese em gel de poliacrilamida para separar fragmentos de DNA entre 10 e 1500 pb de comprimento, para iniciar a PCR.

II Separação do DNA alvo durante a fragmentação do DNA celular feita por enzimas termoestáveis, como a transcriptase reversa, a exonucleases e a endonucleases. Para a extração do DNA, essas enzimas são expostas a temperaturas que variam de 50 a 90º C, durante mais de 30 ciclos de repetição de reações.

III Para iniciar a PCR, em torno de 50mg de DNA alvo devem ser misturados com tampão de corrida, Taq DNA Polimerase, um par de primers feito de oligonucleotídeos e um suplemento de nucleotídeos.

IV Os primers são importantes para iniciar as reações de síntese de DNA, as quais serão realizadas pela Taq polimerase. Ambos devem se ligar às duas fitas do DNA para amplificação adequada.

V A reação entre as moléculas do item IV (primers e Taq polimerase) deve ocorrer em temperatura média de 50 a 60° C, quando as pontes de hidrogênio entre os nu cleotídeos são quebradas, separando a dupla hélice, para que ambas as fitas sejam copiadas repetidas vezes.

Entre esses passos, estão corretos os descritos nos itens