por serem proteínas purificadas, os anticorpos podem ser armazenados a –20ºC, pois são menos atingidos por sucessivos ciclos de congelamento e degelo.

quando se usa anticorpos conjugados à peroxidase, algumas células podem marcar inespecificamente devido ao auto grau de peroxidade endógena, como por exemplo mastócitos.

no processo de desparafinização e re-hidratação, as soluções podem ser sempre reutilizadas, uma vez que não são etapas críticas para a qualidade da reação.

após re-hidratar os cortes de parafina, deve-se secar o corte histológico de modo a garantir que este esteja bem aderido à lâmina de vidro antes dos procedimentos e das incubações longas com anticorpos.

se o tecido foi fervido para recuperação antigênica, não há necessidade de inativar a peroxidase endógena.