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A bilirrubina total é determinada pela sua conjugação com um sal diazônio, mais freqüentemente o ácido sulfanílico diazotado. Essa reação é bifásica, uma fase rápida conferida à bilirrubina conjugada que é solúvel e uma fase lenta devido à bilirrubina não conjugada e menos solúvel. Para otimizar essa reação, faz-se uso de agentes solubilizantes como a(o) .