A esterilização por autoclave tem como principal vantagem o tempo de esterilização. Os padrões de tempo, temperatura e pressão para esterilização pelo vapor variam de acordo com o aparelho e encontram-se dentro de: 121° C a 127° C (2 atm pressão) por 5 a 20 minutos e 132° C a 134° C (3 atm pressão) por 3 a 5 minutos de esterilização.

Na autoclave é possível fazer a esterilização de gaze, algodão, campos de tecido de algodão. A desvantagem é a oxidação de material de aço carbono.

A autoclave deve ser preenchida até o máximo de 90% de sua capacidade para facilitar a penetração e circulação do vapor e a eliminação do ar na autoclave. Os pacotes maiores devem ser dispostos na parte inferior e os menores na superior, sem tocar nas paredes da autoclave.

Os pacotes devem ser retirados da autoclave frios e secos para evitar que o vapor se condense na temperatura ambiente, criando uma pressão negativa, que aspira o ar (contaminado) do ambiente, através do invólucro.

A autoclave deve ser limpa diariamente com pano úmido e sabão neutro. A limpeza dos filtros e do purgador deve ser feito pelo técnico de manutenção.