Os tumores hipofisários são muito pequenos e podem não ser detectados por RM.

A única forma de localizar o tumor na síndrome é o cateterismo de ambas as veias petrosas (que drenam a hipófise) e a medição do ACTH nessas veias 5 minutos após uma injeção de 100 mcg ou bolus de 1 mcg/kg de CHR (humano ou bovino).

Um paciente com suspeita de síndrome de Cushing, com concentração muito baixa de cortisol urinário livre, quase certamente apresenta síndrome de Cushing.

As concentrações de ACTH são medidas para determinar a causa da síndrome de Cushing.

A alta ingestão de proteínas e a administração de potássio (ou fármacos que poupam potássio, como a espironolactona) agravam o quadro.