A Lei de Lambert-Beer determina que a concentração de uma substância é inversamente proporcional à absorbância e, por conseguinte, diretamente proporcional à transmitância.

A manutenção preventiva é recomendada para ambos os tipos de equipamentos a cada dois anos, por meio de soluções padrões comerciais, com limites de aceitabilidade das leituras em, pelo menos, três comprimentos de onda do espectro visível, ultravioleta e infravermelho.

O limite de reatividade ou cut off, que permite diferenciar as mostras positivas ou reagentes daquelas negativas ou não reagentes, tem também como variável a marca e o modelo do leitor de ELISA utilizado.

Resguardadas as variações de marcas e modelos existentes no mercado, a única diferença conceitual entre os componentes de um leitor de ELISA e um espectrofotômetro é a fonte estável de energia radiante.

Amostras de soro lipêmicas e hemolisadas exigem diluição 1:10 com solução salina tamponada (fosfato pH 7,2), para que não haja interferência na leitura espectrofotométrica de parâmetros bioquímicos.