Em um projeto que envolve a expressão recombinante de proteínas, você pretende inserir a seguinte sequência de aminoácidos num plasmídeo de expressão: GlyGlyGlyGlySerLeuValProArgGlySerGlyGlyGlyGlySer (linker para o Fator Tu de elongação). Para tanto, você irá sintetizar este fragmento de DNA artificialmente e cloná-lo num vetor com extremidades cegas (blunt) geradas pela enzima SmaI e, posteriormente, subcloná-lo no vetor de expressão.

Qual a sequência de nucleotídeos que deverá ser encomendada a fim de se obter o produto desejado? Note que as sequências dos dois vetores de clonagem estão indicadas a seguir e o inserto deverá ser clonado entre os sítios de EcoRI e BamHI. A figura no final da página contém uma tabela do código genético.

Primeiro vetor (clonagem):

5’-GAATTCGAGCTCGGTACCCGGGGATCCTCTAGAGTCGACCTGCAGGCATGCAAGCTT -3’

Segundo vetor (subclonagem e expressão recombinante):

5’-GAATTCTCTAGAGTCGACCTG GGA TCC-3’

Os nucleotídeos sublinhados formam códons com o resto do vetor, ou seja, estão em fase (in frame) de leitura correto.

O código genético, escrito por convenção na forma na qual os códons aparecem no mRNA. Os três códons de terminação, UAA,UAG e UGA, estão no quadro em vermelho; o códon iniciador, AUG, está em verde.