O pH de cada lote de ágar Müeller-Hinton deve ser verificado quando o meio é preparado. O meio ágar deve ter pH entre 2,1 e 5,2 à temperatura ambiente após solidificação.

Para padronizar a densidade do inóculo para um teste de sensibilidade deve-se usar um controle de turbidez de BaSO₄, equivalente a uma solução padrão de McFarland 0,5 ou seu equivalente óptico.

Se, logo antes de usar, o meio apresentar excesso de umidade na superfície, as placas devem ser colocadas em uma incubadora (35°C) ou capela de fluxo laminar à temperatura ambiente, com as tampas entre abertas, até que o excesso de umidade superficial evapore.

Os frascos contendo discos de papel especificamente preparados para os testes de sensibilidade disponíveis comercialmente devem ser armazenados em recipientes à temperatura de 8°C ou menos, ou congelar a –14°C ou menos, num congelador comum (não do tipo “frost-free”) até o momento de usar.

O ágar Müeller-Hinton é o melhor para testes rotineiros de sensibilidade contra bactérias não fastidiosas, por demonstrar reprodutibilidade aceitável entre os diferentes lotes nos testes de sensibilidade, conter baixo teor de inibidores de sulfonamida, trimetoprim e tetraciclina e permitir crescimento satisfatório dos patógenos não fastidiosos.