Nos estudos farmacocinéticos pré-clínicos do 25a, um promissor novo diurético, da classe dos inibidores de transportadores de ureia, a proporção de ligação da substância a proteínas plasmáticas de ratos Sprague-Dawley (SD) e de humanos foi avaliada por microdiálise. 400 µL de plasma contendo 50, 500 e 2500 ng mL^-1 de 25a foram depositados nas bolsas de diálise (lado do plasma) e as bolsas foram colocadas em tubos contendo 4 mL de tampão de diálise (lado do tampão). Após agitação e incubação a 37±1°C por 5 h, alíquotas de 50 µL foram tomadas de ambos os lados (lado do plasma e lado do tampão), diluídas a 100 µL e acrescidas de 600µL de acetonitrila (contendo 10 ng mL^-1 de padrão interno) para precipitação das proteínas e subsequente análise por cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massas sequencial (LC–MS/MS).
A proporção de ligação da substância a proteínas plasmáticas (%) foi calculada como 100% x (1- Concentração_{(lado do tampão)}/Concentração_{(lado do plasma)} ) e os resultados encontram-se na tabela abaixo.


Observe as afirmativas a seguir, em relação à determinação in vitro da ligação do 25a a proteínas plasmáticas:
I – O valor médio de ligação a proteínas plasmáticas do 25a no plasma humano e de rato foi de 38,8% – 44,1% e 61,4% – 64,5%, respectivamente, indicando uma ligeira diferença entre as espécies, enquanto a ligação a proteínas plasmáticas do 25a em ambas as matrizes de plasma foi relativamente baixa a moderada em comparação com a substância utilizada como composto de referência (varfarina) (98,5%).
II – Considerando que a ligação a proteínas plasmáticas do 25a em plasma humano foi relativamente baixa, esse resultado indica que a droga é pouco eficiente em atravessar as membranas celulares ou se difundir.
III – A ligação a proteínas plasmáticas em cada nível de concentração não mostrou diferenças significativas (p > 0,05, teste t de Student), indicando que a ligação do 25a com as proteínas plasmáticas independe da concentração.
Das afirmativas acima, apenas: