Ocorre mobilização de um dos reagentes em uma fase sólida, enquanto outro reagente é ligado a uma enzima, com preservação tanto da atividade enzimática como da imunológica do anticorpo;

As lavagens entre os períodos de incubação não devem ser realizadas com tampão fosfato contendo Tween 20 a 0,05%;

O teste tem baixa precisão se os reagentes e os parâmetros do ensaio forem bem padronizados;

Nos ensaios heterogêneos, as enzimas menos utilizadas para a realização básica são: peroxidase, fosfatase, alcalina, β- galactosidase, anidrase carbônica e acetilcolinesterase;