A primeira etapa dessa coloração consiste na adição do corante vermelho carbol-fucsina na lâmina contendo o esfregaço previamente fixado, sendo necessário aplicar calor para diminuir a penetração e a retenção do corante.

Para corar as bactérias álcool-acidorresistentes, inicialmente se confecciona um esfregaço em lâmina do material clínico, que deve ser fixado pelo frio.

Após a lavagem com água, a lâmina é descolorada com álcool-ácido, nessa etapa, as bactérias álcoolacidorresistentes permanecem coradas com o corante vermelho, no entanto, as outras bactérias que não têm o ácido micólico em sua parece celular acabam sendo descoloridas.

No microscópio óptico, as bactérias álcool-acidorresistentes se apresentam cor contracorante (geralmente azul), enquanto o fundo da lâmina e os outros microrganismos não acidorresistentes apresentam com cor rosa/vermelha.