Como vantagem, pode-se afirmar que a atividade enzimática não pode ser afetada por constituintes do plasma.

Nesses tipos de ensaios, invariavelmente, os anticorpos são fixados à fase sólida, nunca o antígeno.

Dentre as enzimas mais utilizadas estão a peroxidase de raiz forte, a beta-galactosidase e a fosfatase alcalina.

Os cromógenos mais utilizados são a ortofenilenodiamina (OPD), ácido 5-amino-salicílico, ortotoluidina, 2,2-diazino do ácido etilbenzotialino sulfônico (ABTS) e tetrametilbenzidina (TMB), que também se constituem nos substratos das enzimas presentes nos conjugados.

Apesar do nome utilizado, não existem enzimas envolvidas nesta metodologia, somente anticorpos.