No Brasil, a cocirculação de diferentes arbovírus reforça a necessidade do desenvolvimento de protocolos de diagnóstico molecular rápidos, específi cos, sensíveis e que permitam a detecção, sempre que possível, de mais de um arbovírus na mesma reação. Dentre os protocolos de amplificação do genoma viral, as técnicas em tempo real apresentam vantagens neste contexto, principalmente quando utilizam sondas marcadas com fluoróforos. Sobre a técnica supracitada, avalie se são verdadeiras (V) ou falsas (F) as afirmativas a seguir:

I. As sondas são marcadas com uma molécula que emite fluorescência (quencher) numa extremidade e com uma molécula que absorve a fluorescência (reporter) na outra extremidade.

II. Em um protocolo para alvos múltiplos (multiplex) numa mesma reação, as sondas específi cas para cada sequência genômica poderão ser marcadas com a mesma molécula repórter, necessitando somente de moléculas quencher distintas.

III. Durante o desenho dos oligonucleotídeos, a região de hibridização da sonda deve estar localizada à montante da região de hibridização do primer sense (forward).

As afirmativas I, II e III são, respectivamente: