As bactérias gram-negativas coram-se por fim em azul por não descorarem com álcool.

As bactérias gram-positivas ao fim terão adquirido coloração azulada, uma vez que sua parede mais espessa retém o corante safranina.

Após a primeira etapa da coloração, as bactérias gram-positivas coram-se pelo corante cristal violeta, o qual não será removido pelo álcoolacetona, pois a sua parede celular é espessa, com várias camadas de peptidioglicanos que impedem a retirada do cristal violeta.

Todos os microrganismos patogênicos existentes na natureza podem se corar bem pelo gram, o que torna esse procedimento de coloracão essencial para a identificação de patógenos em microscopia ótica.

Nessa coloração, a safranina é usada como corante primário, e o cristal violeta como corante secundário.