Na ausência de outros fatores que modifiquem a intensidade do sinal de fluorescência, pode- -se utilizar qualquer comprimento de onda de excitação sem afetar a intensidade da fluorescência emitida.

Em qualquer experimento de detecção de fluorescência, o espectro de emissão é independente do comprimento de onda de excitação.

O comprimento de onda de excitação é menor que o comprimento de onda de emissão.

A emissão de fluorescência depende da formação de um estado excitado da molécula emissora, obtido através da absorção de um fóton.

A intensidade do sinal de fluorescência é diretamente proporcional à intensidade da luz de excitação que incide sobre a amostra.