Espectrofotômetros são aparelhos que utilizam prismas ou grades de difração na seleção da porção desejada do espectro.

As cubetas podem ser feitas com vários materiais e ter várias formas, tais características dependem do tipo de instrumento e do espectro utilizado.

Para aparelhos manuais, a fórmula geral utilizada é: concentração da substância no sangue = A x B/C, onde A corresponde à absorbância da amostra, B corresponde à concentração da solução de calibração e C corresponde à absorbância da solução de calibração.

A solução "branco", que não contém a substância a ser analisada, apresenta transmitância de 0%.

Em procedimentos manuais, são necessários 3 tubos de ensaio: amostra, padrão e branco. O tubo branco é utilizado para ajustar o zero do aparelho.