No método da difusão do disco, os discos especiais de papel-filtro impregnados com concentração padronizada de antibiótico são colocados sobre uma placa de Ágar CLED contendo o inóculo.

O preparo do inóculo deve ser feito através de uma suspensão de bactérias, utilizando uma solução salina a 0,9%.

Tem o objetivo de identificar e quantificar a bactéria isolada em unidades formadoras de colônias por mL (UFC/mL) em meio Ágar Sabouraud.

Ainda não existe automação para essa análise.

Em pequenas e médias rotinas, é comum a utilização do método de difusão do disco de papel-filtro impregnado com concentração padronizada de antibiótico colocado em placa de 150mm com meio Ágar Mueller Hinton contendo o inóculo previamente suspendido em água estéril de acordo com a escala de Mcfarland.