Para o monitoramento das infecções pelo HIV e hepatites virais, o Departamento de DST, Aids e Hepatites Virais coordena uma rede nacional de laboratórios de biologia molecular que realizam, entre outros, exames de carga viral. Sobre as metodologias moleculares para quantificação da carga viral do HIV, considere as afirmativas abaixo.

I. A metodologia b-DNA, que foi utilizada na rede até 2012, tem como característica principal a amplificação do DNA por meio de sondas marcadas com intercalante de DNA.

II. A reação de PCR em tempo real baseia-se na detecção de um sinal fluorescente simultâneo à amplificação do DNA e dispensa os processamentos pós-amplificação, minimizando o risco de contaminação.

III. Devido a sua sensibilidade e especificidade, a quantificação da carga viral do HIV pela PCR em tempo real dispensa a etapa de transcrição reversa.

IV. A utilização de um controle interno em cada tubo de reação possibilita identificar a presença de inibidores na amostra.

V. Em virtude da possibilidade de haver fluorescências inespecíficas (background), o ponto que detecta o ciclo no qual a reação atinge o limiar da fase exponencial é denominado CT (Cycle Threshold). Esse ponto permite a quantificação exata e reprodutível na amostra.

Assinale a alternativa CORRETA.