No enzimoimunoensaio em fase homogênea (EMIT - Enzyme Multiple Immunosorbent Technique), é necessário realizar a separação da fração ligada da fração livre, tendo este ensaio um campo de aplicação restrito, por sua baixa sensibilidade, e sendo muito utilizado no doseamento de determinados fármacos.

No enzimoimunoensaio em fase heterogênea (ELISA - Enzyme Linked Immunosorbent Assay) não é necessário realizar a separação da fração ligada da fração livre, cuja versão mais comum – ensaios não competitivos – recorre ao princípio sandwich.

No enzimoimunoensaio em fase heterogênea, a fase sólida contendo o antígeno ou o anticorpo marcado com a enzima é incubada com o substrato enzimático à temperatura constante e, ao término da reação, o produto pode ser medido com vários tipos de detectores, dependendo do substrato utilizado.

Os enzimoimunoensaios inibitórios em fase homogênea, baseados em ligação não competitiva, requerem curtos períodos de incubação para alcançarem um nível de detecção bastante sensível, tendo como exemplo a detecção de ferritina sérica, que apresenta uma faixa de detecção de 15 a 650 ng/mL.

Duas das vantagens relacionadas com os enzimoimunoensaios são: (1) a atividade enzimática não pode ser afetada por constituintes plasmáticos e (2) os reagentes são relativamente baratos e podem ter uma vida de prateleira significativamente longa.