A microscopia é o método mais comum utilizado para detecção de microrganismos diretamente de amostras clínicas e para caracterização morfotintorial dos isolados em cultura. Com base nas técnicas de microscopias empregadas no diagnóstico microbiológico, considere as afirmativas a seguir.

I. Ao confeccionar esfregaços para coloração de Gram deve-se atentar para a espessura do esfregaço; quanto mais material for colocado na lâmina, mais difícil será a descoloração com álcool-acetona, prejudicando a interpretação do exame.

II. O excesso de exposição do esfregaço ao álcool-acetona prejudica a visualização correta dos microrganismos gram-negativos no esfregaço.

III. As lâminas devem ser fixadas antes das colorações. A fixação pode ser feita pelo calor, submetendo a lâmina à chama do bico de Bunsen até completa fixação, por aproximadamente 1 minuto.

IV. A coloração de Albert-Laybourn é recomendada para pesquisa de granulações metacromáticas de algumas espécies de Corynebacterium, em especial do C. diphteriae em amostras de orofaringe e nasofaringe.

V. A coloração de Ziehl-Neelsen a frio é o método recomendado para coloração de linfa por preservar as condições morfotintoriais do bacilo de Hansen; nesse caso, o esfregaço deve ser coberto com solução de fucsina de Ziehl-Neelsen durante 20 minutos.

Assinale a alternativa CORRETA.