Haemphilus ducreyi é dificilmente corado pelo método de Gram, devendo o diagnóstico ser feito a partir da cultura crescida em agar Sangue.

para a pesquisa de Chlamydia trachomatis, que são microrganismos intracelulares obrigatórios, normalmente são realizados exames especiais, baseados em imunoensaios ou em métodos moleculares.

exames a fresco a partir da secreção vaginal são mais sensíveis e específicos para o diagnóstico de vaginose por Gardnerella vaginalis do que o esfregaço dessa secreção corado pelo método de gram.

para a pesquisa inicial de Treponema pallidum faz-se um esfregaço do fluido obtido da lesão genital, que deve ser corado pelo método de gram.

para secreção vaginal, recomenda-se realizar a cultura tanto para isolamento de anaeróbios facultativos quanto de anaeróbios.