A transmissão luminosa aumenta na medida em que se intensifica a concentração da solução em análise.

A hemólise libera a hemoglobina das hemácias e a hemoglobina livre interfere em uma faixa de comprimento de onda (desde 415 até 570 nm), que pode afetar a leitura das concentrações dos analitos, cujos ensaios utilizam os mesmos comprimentos de onda.

A base da espectrofotometria consiste em passar um feixe de luz através da amostra e fazer a medição da intensidade da luz que atinge o detector.

A determinação da concentração do analito é feita a partir da comparação de uma solução-padrão de concentração conhecida da mesma substância.

Devido à alta sensibilidade, é essencial que seja submetido a uma limpeza regular e empregado corretamente para garantir resultados confiáveis e exatos.