de Lambert-Beer postula uma relação matemática entre a transmitância e a absorbância para se calcular a concentração de um determinado analito em solução, de modo que a intensidade da luz emitida cresce exponencialmente à medida que a espessura do meio absorvente aumenta aritmeticamente.

A importância do uso do branco reside apenas no estabelecimento da energia incidente (I0), não sendo necessária a compensação do efeito de lente provocado pelas cubetas, perdas por reflexão e refração e eliminação da absorbância dos reagentes utilizados na preparação das amostras.

As medidas espectrofotométricas efetuam-se com amostras na temperatura ambiente. Porém, é sabido que variações na temperatura não afetam a solubilidade e a dissociação das moléculas, uma vez que esses analitos estão na forma molecular.

A análise espectrofotométrica é uma medida qualitativa da absorção ou transmissão de energia provinda de uma luz branca que passa por uma barreira selecionada de faixa de comprimento de onda, atravessando uma solução em análise e esbarrando em uma célula fotoelétrica. Dessa forma, qualquer luz que não seja absorvida é transmitida a um detector, que transforma a energia luminosa em elétrica.

Os raios X, assim como a luz visível, fazem parte do espectro de radiação eletromagnético, compondo a faixa de trabalho da maioria dos analisadores bioquímicos (E).