a composição da parede celular das bactérias Gram positivas determina a fixação do corante cristal violeta/lugol, que não é removido pela ação do álcool/acetona.

a morfologia das culturas bacterianas determina a coloração diferencial, em que os cocos são Gram positivas e os bacilos são Gram negativas.

o uso do contra-corante, após a lavagem com etanol, determina a coloração vermelha das bactérias Gram-positivas.

a coloração diferencial é determinada pela ação conjunta do corante e contra-corante nas estruturas celulares internas, resultando em coloração roxa para bactérias Gram positivas e vermelha para Gram negativas.

a membrana citoplasmática define a cor roxa ou vermelha da célula bacteriana.