A imunofluorescência direta é o método mais utilizado apesar de apresentar reação cruzada com doença de Chagas e leishmaniose visceral, o que dificulta o diagnóstico em áreas endêmicas.

A intradermorreação de Montenegro detecta a reação de hipersensibilidade do hospedeiro ao antígeno de leishmania e permite diferenciar a doença atual da pregressa.

A sensibilidade do método de detecção do parasito por exame direto aumenta com o tempo de evolução da lesão, sendo maior após um ano.

Na leishmaniose tegumentar a forma promastigota do parasito pode ser encontrada no interior de macrófagos obtidos após raspagem da borda da lesão e corados por Giemsa.

A pesquisa parasitológica do parasito é a primeira escolha para o diagnóstico laboratorial da leishmaniose tegumentar devido a rapidez, baixo custo e facilidade de execução.