Envolve a adição da amostra clínica a anticorpos específicos aderidos a uma superfície sólida.

Deve-se adicionar sempre um controle negativo, que será uma amostra negativa contendo somente antígeno marcado.

Antígenos que não se ligaram são retirados por lavagens antes da adição de um segundo anticorpo marcado (conjugado), geralmente com uma enzima.

Amplifica o sinal, por isso é mais sensível. Contudo, reações inespecíficas podem ocorrer.