Vitamina D é encontrada em duas formas: ergocalciferol ou vitamina D2 e colecalciferol ou vitamina D3. O ergocalciferol ou vitamina D2 é a forma da vitamina D proveniente das plantas e fungos onde é formada pela irradiação do ergosterol, sendo obtido na dieta pela absorção no duodeno e jejuno.

A avaliação do estado nutricional da vitamina D é feita pela dosagem da 25(OH)vitamina D (calcidiol ou calcifediol), a forma mais abundante e de depósito da vitamina D, com meia vida de 2 a 3 semanas.

A insuficiência e a deficiência de vitamina D não são comuns em lactentes alimentados exclusivamente com leite materno, principalmente se nascidos prematuros (pois tiveram mais tempo de acumular depósitos transferidos da mãe pela placenta), filhos de mães que tiveram hipovitaminose D durante a gestação, ou de pele clara.

A intoxicação pela vitamina D é diagnosticada quando o nível sérico da 25(OH)vitamina D é >150 ng/mL, e associado a hipercalcemia, hipercalciúria e supressão do Paratormônio (PTH)

Considera-se como padrão ouro, a dosagem da 25(OH)vitamina D pela espectrocromatografia liquida de massa em tandem (LC-MS), método caro e laborioso.