A coloração de Gram é uma técnica fundamental e um dos primeiros passos na identificação de bactérias em amostras clínicas, permitindo a diferenciação dos microrganismos em dois grandes grupos (Gram-positivos e Gram-negativos) com base nas características de sua parede celular. Um técnico em patologia clínica está realizando a coloração de Gram em um esfregaço preparado a partir de uma amostra de líquido cefalorraquidiano (LCR) de um paciente com suspeita de meningite. A execução correta de cada etapa da técnica é vital para um resultado fidedigno. Acerca dos reagentes e dos princípios da coloração de Gram, registre V, para as afirmativas verdadeiras, e F, para as falsas:

(__) O cristal violeta, primeiro corante utilizado, penetra e cora todas as células bacterianas de roxo, independentemente da estrutura de sua parede celular.

(__) O lugol (solução de iodo) atua como um agente descorante, removendo seletivamente o cristal violeta das bactérias Gram-negativas, enquanto as Gram-positivas permanecem coradas.

(__) A etapa de descoloração, geralmente realizada com uma mistura de álcool-acetona, é a etapa mais crítica do processo; ela remove o complexo cristal violeta-iodo da fina camada de peptidoglicano das bactérias Gram-negativas, mas não consegue atravessar a espessa camada de peptidoglicano das Gram-positivas.

(__) A fucsina (ou safranina), utilizada como corante de fundo ou contra-corante, cora de vermelho ou rosa as bactérias Gram-negativas que foram previamente descoradas, permitindo sua visualização ao microscópio, enquanto não altera a cor roxa das bactérias Gram-positivas.

Após análise, assinale a alternativa que apresenta a sequência correta dos itens acima, de cima para baixo: