O tampão fosfato de sódio é amplamente utilizado na homogeneização de órgãos e tecidos animais para ensaios enzimáticos. Durante seu treinamento em um laboratório, um estagiário recebeu a tarefa de preparar uma solução tampão a 50 mM, pH 7,4. Ele seguiu os seguintes procedimentos:

1. Pesou 12 g de NaH₂PO₄, adicionou 100 mL de água, misturou e rotulou como “Solução de NaH₂PO₄ 1 M”.
2. Pesou 142 g de Na₂HPO₄, dissolveu em 80 mL de água e completou para 100 mL, rotulando como “Solução de Na₂HPO₄ 1 M”.

No dia seguinte, ao retornar ao laboratório, percebeu que as soluções que havia preparado tinham sido utilizadas. Com autorização, utilizou soluções estoque de NaH₂PO₄ e Na₂HPO4 preparadas a 1 M, disponibilizadas por um técnico experiente do laboratório. Ele prosseguiu da seguinte forma:

3. Misturou 100 mL da solução de NaH₂PO₄ com 60 mL da solução de Na2HPO4, rotulando como “Tampão fosfato de sódio 1 M, pH 7,4”.
4. Diluiu 5 mL do tampão preparado em “3” com 100 mL de água, rotulando como “Tampão fosfato de sódio 50 mM, pH 7,4”.

Para todos os procedimentos, o estagiário considerou as seguintes informações presentes no livro de protocolos do laboratório:



Durante esses dois dias, quantos procedimentos exatamente foram realizados de forma incorreta?