A atividade da RuBisCO se restringe à fixação de CO₂ no ciclo de Calvin.

A RuBisCO catalisa a reação entre o dióxido de carbono (CO2) e a ribulose-1,5-bisfosfato (RuBP), formando moléculas intermediárias que entram no ciclo de Calvin.

A RuBisCO é responsável pela produção direta de glicose durante a fase escura da fotossíntese.

Uma baixa proporção CO₂:O₂ favorece o Ciclo de Calvin em detrimento da fotorrespiração.

A RuBisCO é encontrada exclusivamente em plantas C4, sendo ausente em plantas C3 e CAM.