Os anticorpos secundários servem para dar uma maior sensibilidade à técnica.

São utilizados anticorpos primários e secundários para a revelação da membrana.

As proteínas separadas no gel de eletroforese são transferidas para uma membrana.

O sinal detectado pelo complexo proteína-anticorpo é diretamente proporcional à quantidade de proteínas na amostra.

As proteínas imobilizadas na membrana são incubadas com o primeiro anticorpo e, rapidamente, reveladas por quimioluminescência.