Abaixo está a descrição do método de coloração pela Técnica de Gram, ordene-a:

I. O álcool é lavado, e a lâmina é então corada com safranina, um corante básico vermelho.

II. Após curto período, o corante púrpura é lavado e recobre-se o esfregaço com iodo. Quando o iodo é lavado, ambas as bactérias Gram-positivas e Gram-negativas aparecem em cor violeta escuro ou púrpura.

III. A seguir, a lâmina é lavada com álcool ou com uma solução álcool-acetona, sendo um agente descorante que remove a coloração púrpura das células de algumas espécies específicas de bactérias.

IV. O esfregaço é lavado novamente, seco com papel e examinado microscopicamente.

V. O esfregaço fixado em calor é coberto com um corante básico púrpura, geralmente cristal violeta. Colorindo-se todas as células, denominada coloração primária.

Fonte: TORTORA; FUNKE; CASE, 2017 apud Tanaka, Tânia Leiko Manual de microbiologia. São Paulo: Setor de Publicações. Centro Universitário São Camilo, 2023.

Assinale a alternativa com a sequência CORRETA: