Durante a caracterização cinética de uma enzima envolvida no metabolismo energético, um pesquisador observou que a velocidade da reação aumentava proporcionalmente à concentração de substrato até certo ponto. Em concentrações mais elevadas, contudo, a velocidade começou a diminuir significativamente, sem alterações no pH, na temperatura, na concentração enzimática ou no produto da reação. Com base nas informações, assinale a alternativa correta.

Durante um ensaio cinético em laboratório, uma pesquisadora avaliava duas enzimas distintas que catalisavam a mesma reação metabólica. Após a coleta dos dados e ajuste ao modelo de Michaelis-Menten, ela observou que ambas as enzimas atingiam a mesma velocidade máxima (Vmax). No entanto, notou que os valores de km eram diferentes: enquanto a enzima A apresentava um km relativamente baixo, a enzima B demonstrava um km bastante elevado. Considerando as observações feitas pela pesquisadora, é correto afirmar que:

A determinação da carga líquida de uma proteína pode ser estabelecida pelo balanço entre seus resíduos de aminoácidos carregados. Ao ser submetida a um campo elétrico em meio aquoso, essa molécula proteica migra em direção ao polo de carga oposta. A velocidade de migração é influenciada criticamente pela carga líquida da proteína, seu tamanho (massa molecular) e sua forma estrutural. Essa propriedade físico-química é o fundamento da eletroforese em gel de poliacrilamida-SDS (SDS-PAGE), uma técnica essencial na análise laboratorial de proteínas. A respeito da técnica SDS-PAGE para separação de proteínas, analise as assertivas a seguir:

I. É um método de separação utilizado para purificar apenas proteínas solúveis em água.
II. A estrutura nativa das proteínas é desnaturada em uma solução que inclui um detergente aniônico.
III. Agentes redutores, como o β-mercaptoetanol, são adicionados para romper ligações dissulfeto, de forma que os polipeptídeos constituintes possam ser analisados separadamente.
IV. O tamanho do poro do gel pode ser ajustado de maneira que seja suficientemente grande para retardar a migração das moléculas proteicas de interesse.


Quais estão corretas?

A cromatografia líquida representa um conjunto de técnicas empregadas na separação, purificação e caracterização de biomoléculas, como proteínas e peptídeos. A escolha da técnica adequada depende tanto das propriedades físico-químicas da molécula-alvo quanto do objetivo experimental, exigindo compreensão detalhada dos princípios de cada abordagem. Sobre as diferentes técnicas de cromatografia líquida, analise as assertivas abaixo:

I. Na cromatografia de fase reversa, compostos apolares são eluídos antes, enquanto os compostos polares ficam retidos na coluna e são eluídos tardiamente, à medida que a proporção de solvente orgânico na fase móvel aumenta.

II. Na cromatografia de troca iônica, o gradiente salino compete com a proteína pelos sítios de ligação.

III. Na cromatografia de gelfiltração, as moléculas maiores são eluídas primeiro, pois não penetram nos poros da matriz.

IV. Na cromatografia de imunoafinidade, a eficiência da recuperação e captura do analito independem das condições de pH.


Quais estão corretas?

Durante a purificação de uma enzima vegetal, o pesquisador aplicou o método de salting-out utilizando sulfato de amônio em diferentes níveis de saturação. Observou-se que, conforme a concentração do sal aumentava, distintas frações proteicas se precipitavam em etapas sucessivas. Com base nos fundamentos desse processo, assinale a alternativa correta.

A ubiquitina é uma pequena proteína altamente conservada nos eucariotos, cuja conjugação a outras proteínas desempenha papel central na regulação de diversos processos celulares, incluindo controle do ciclo celular, resposta ao estresse e turnover proteico. Seu acoplamento é mediado por uma cascata enzimática específica e pode resultar em diferentes destinos funcionais para a proteína-alvo. Com base nas funções conhecidas da ubiquitinação, assinale a alternativa correta.

Durante o enovelamento de uma proteína, diferentes interações estabilizam os níveis estruturais da molécula. As pontes de hidrogênio formadas entre o oxigênio da carbonila e o hidrogênio da amida da cadeia principal do polipeptídeo são responsáveis diretamente por

Durante a repressão transcricional em eucariotos, a regulação da cromatina desempenha papel central na modulação da acessibilidade do DNA à maquinaria de transcrição. Diversos complexos podem interagir com fatores de transcrição, alterando o estado estrutural da cromatina e interferindo na expressão gênica. Sobre o tema, assinale a alternativa correta.

Durante um ensaio de expressão gênica, uma pesquisadora utilizou um sistema repórter de luciferase para avaliar a atividade transcricional do promotor do gene CDKN1A em uma linhagem de fibroblastos humanos. O gene CDKN1A é regulado pelo fator de transcrição TP53, que se ativa em resposta a danos no DNA, promovendo a parada do ciclo celular. As células foram tratadas com doxorrubicina, um agente genotóxico conhecido por induzir fosforilação e ativação de TP53. Após 12 horas, observou-se um aumento significativo da luminescência em relação às amostras controle. Com base nessas observações e no funcionamento do sistema repórter, é correto afirmar que:

A fim de introduzir uma mutação pontual no gene OsSPL14, envolvido no controle do perfilhamento e rendimento de grãos, em uma espécie de arroz, pesquisadores utilizaram o sistema CRISPR-Cas9. Após a clivagem da dupla fita de DNA, foram observados dois tipos distintos de eventos: mutações do tipo inserção/deleção e correções precisas da sequência-alvo. Com base nos mecanismos moleculares de reparo de DNA induzidos por Cas9, assinale a alternativa correta sobre a diferença entre NHEJ e HDR.