Ao iniciar o procedimento deve-se verificar o nível da água, e completar se necessário, até atingir o nível adequado (cobrir as resistências elétricas).

Os materiais devem ser acondicionados de modo que o vapor circule livremente e sem que se encoste às paredes do cesto metálico.

É necessário fechar a tampa, apertando cuidadosamente os parafusos diametralmente opostos, deixando aberta a válvula de escapamento de ar no início.

Antes de se regular o aquecimento da autoclave de modo a permanecer na temperatura desejada, não é necessário esperar o manômetro atingir a pressão interna desejada (em geral 1,1 atm ou 1,1 kgf/cm2) o que corresponde à temperatura de 121ºC.

Ao término do tempo necessário, desligar o aquecimento e, com a válvula de escapamento aberta, deixar a pressão cair lentamente até o ponto zero antes de abrir.