A DBO determina a quantidade de oxigênio necessária para se consumir quimicamente a matéria orgânica contida na amostra.

A nitrificação é um interferente no ensaio de DQO que causa interferência positiva no resultado do ensaio, pois consome parte do oxigênio equivalente para oxidação do nitrogênio. Em amostras com teor de nitrogênio elevado é necessário adicionar um inibidor de nitrificação no ensaio.

O teor de cloro residual (Cl₂) é um interferente no ensaio de DBO, e deve-se adicionar ácido sulfúrico na amostra em quantidade equivalente para eliminar essa interferência.

Um efluente de curtume precisa ter a DQO determinada com cuidado, pois a quantidade de cloretos presente na amostra pode levar a interferências no resultado do ensaio, quando determinada pelo método de refluxo fechado.

Na análise de DBO, o agente oxidante da reação são os microrganismos presentes na amostra.