Para realizar uma reação de PCR, alguns reagentes são necessários em associação a alterações de temperatura que ocorrem de forma sucessiva em ciclos.

Analise as afirmativas abaixo que tratam de fatores fundamentais para que uma reação de PCR funcione e produza a somatória de massa de produto amplificado condizente com o esperado.

1. Desenho correto dos oligonucleotídeos específicos para amplificação da sequência de interesse.

2. Quantidade satisfatória de oligonucleotídeos que permita promover o número de ciclos desejados.

3. Temperatura de anelamento igual ao TM do nucleotídeo.

4. Temperaturas de anelamento menores que o TM farão com que a amplificação torne-se menos restritiva.

5. Temperaturas de anelamento maiores que o TM farão com que a amplificação torne-se mais restritiva.

6. Tempo de extensão proporcional, em minutos, ao tamanho do amplicon, seguindo a regra de 1 min/kb a ser amplificado.

Marque a alternativa correta.