Em relação à regulação gênica em eucariotos e procariotos, analise as afirmativas a seguir.

I. O processamento do pré-RNAm, através da seleção de sítios alternativos (splicing alternativo), é uma das formas de regulação da expressão gênica em procariotos.

II. Um óperon é uma única unidade transcricional que inclui uma série de genes estruturais, um promotor e um operador, sendo que genes eucarióticos não estão organizados em óperons.

III. Eucariotos possuem sequências, localizadas antes ou após a região promotora, que permitem o aumento dos níveis de expressão gênica.

Assinale a alternativa correta.

Observe as afirmações a seguir, em relação à clivagem do DNA:

I. O DNA pode ser clivado, em sítios específicos, por endonucleases denominadas enzimas de restrição.

II. O resultado do corte de uma molécula de DNA por uma enzima de restrição gera sempre fragmentos com extremidades coesivas.

III. Durante a eletroforese, os fragmentos de DNA migram em direção ao polo negativo, fazendo a separação dos fragmentos de tamanhos diferentes.

Assinale a alternativa correta.

Durante a extração de DNA, a utilização da mistura fenol/clorofórmio tem como finalidade:

O esboço abaixo retrata a presença de SNPs – Polimorfismos de Nucleotídeo Único (do inglês Single Nucleotide Polymorphisms) destacado pelos triângulos em três regiões distintas do genoma: região não codificadora, região regulatória e região que codifica para o gene sob ação da região regulatória a montante.

Relacione a 2ª coluna de acordo com a 1ª.

Marque a alternativa que contém a sequência correta.

Um total de 24 genes foi selecionado em um estudo de análise global da expressão gênica, cujo organismo foi submetido a crescimento em três diferentes condições fisiológicas: 1) 5min na presença de Fe³⁺; 2) 10min na presença de Fe³⁺; 3) 15min na presença de Fe³⁺. Na tentativa de validar esses achados, os pesquisadores resolveram fazer uma reação de qRT-PCR (PCR quantitativo) para os genes A e B, selecionados aleatoriamente a partir dos 24 previamente selecionados. Para isso, cresceram novamente os organismos nas mesmas condições anteriormente analisadas, extraíram seus RNAs totais e, fazendo uso de oligonucleotídeos específicos para cada gene, desencadearam a reação. Os resultados dessa proposta estão esboçados na figura abaixo.

Com base na análise do gráfico, marque a alternativa correta.

Antes das plataformas de sequenciamento de nova geração, um genoma era sequenciado de duas formas: ou por bibliotecas genômicas ou por bibliotecas de EST. Dentre as várias etapas que fazem parte do processo de montagem de uma biblioteca genômica, dez são citadas a seguir.

1. Isolamento do DNA de interesse;

2. Seleção dos transcritos usando coluna de oligo dT;

3. Obtenção do cDNA usando uma transcriptase reversa;

4. Tratamento do DNA com uma enzima de restrição;

5. Clonagem dos insertos em vetores de expressão;

6. Seleção dos clones transformantes que confirmam a presença do inserto no vetor de clonagem;

7. Amplificação dos cDNAs por técnica de PCR;

8. Montagem da biblioteca de transformantes positivos para a clonagem do inserto em placas de 96 poços;

9. Armazenamento das placas da biblioteca em temperatura próxima a - 80ºC;

10. Sequenciamento do inserto fazendo uso de oligonucleotídeos que ancoram nas pontas do vetor, estando direcionados para o interior do inserto.

A somatória das afirmações que fazem parte da construção de uma biblioteca genômica é de:

O método de sequenciamento de Sanger ou dideoxi consiste em uma série de etapas que acaba resultando na determinação sequencial dos nucleotídeos que compõem uma certa fita de DNA.

Leia o fragmento textual a seguir, referente à catálise envolvida nesse método de sequenciamento, completando as lacunas.

A polimerização é feita no sentido da fita crescente, com catálise entre do carbono 3’ da pentose do oligonucleotídeo com o fosfato alfa do dideoxinucleotídeo. Uma vez ligado, o dideoxinucleotídeo acabará expondo um na posição 3’ de sua pentose que, por consequência, impedirá que um outro possa ser polimerizado na fita crescente. Dessa forma, o produto formado pela reação de PCR passará a ter um tamanho específico.

Marque a alternativa cuja sequência preenche corretamente as lacunas.

A técnica denominada RFLP ou polimorfismos dos fragmentos de restrição (do inglês restriction fragment length polymorphism) permite identificar mutações em genes específicos pela capacidade de se investigarem mutações pontuais que adicionam ou eliminam sítios para enzimas de restrição específica.

Analise a figura abaixo.

O gene relacionado com a doença recessiva em questão a ser analisado pela técnica de RFLP possui um tamanho total de 6,0kb, com sítios de restrição que o cortam gerando um fragmento de 5,0kb. O alelo mutante, quando existente, ocasiona o aparecimento de um novo sítio de restrição para a mesma enzima, gerando, assim, dois fragmentos: um de 3,0kb e o outro de 2,0kb, como demonstra o caso de heterozigose demonstrado em A. Sondas radioativas foram desenhadas para ancorarem na região inicial do gene, logo após o primeiro sítio de restrição.

Com base nessa perspectiva e nos resultados apresentados em B, marque a alternativa correta.

O plasmídeo abaixo esboça, em sua composição, a presença do gene da betagalactosidase (lacZ), que é amplamente utilizado como um gene repórter em vetores de clonagem.

Outras regiões também se destacam no plasmídeo:

· amp^R – corresponde ao gene de resistência ao antibiótico ampicilina;

· ori – determina a origem de replicação do plasmídeo;

· HindIII, BamHI ou EcoRi – enzimas de restrição, existentes no interior do gene lacZ, onde um gene pode ser clonado, fazendo uso de uma ou mais dessas enzimas.

Para a produção de uma biblioteca genômica, foi usado o plasmídeo acima e insertos gerados por uso de BamHI que foram ligados mediante uso de DNA ligase. Após esse procedimento, os plasmídeos foram inseridos no interior de bactérias eletrocompetentes cultivadas em meio de cultura rico, contendo Xgal e ampicilina. Após três dias, mantidas a 37ºC, foram obtidas colônias brancas e azuis das bactérias.

Com base nesses resultados e com o objetivo de criar a biblioteca genômica em questão, é correto afirmar que:

O esquema abaixo destaca a complexidade de um gene eucarioto apresentando sítios de sinalização, um ATG que codifica para um códon de iniciação, um códon de terminação e as sequências intrônicas.

Com base nessa figura, marque a alternativa que detalha o significado de X, Y, Z e W, respectivamente.