A transmitância é diretamente proporcional à concentração da solução.

A curva de validação representa graficamente os valores das absorbâncias e das concentrações de um conjunto de soluções-padrão.

A unidade de comprimento de onda é mg/dL e a maioria das leituras espectrofotométricas que ocorrem no laboratório de bioquímica clínica se dá na faixa do infravermelho.

Após a realização da leitura da solução-padrão e da amostra no espectrofotômetro, o fator de calibração obtido, utilizado para o cálculo da concentração do analito na amostra, consiste na absorbância da solução-padrão dividida pela concentração da solução-padrão.