A espectrofotometria pode utilizar luz para medir concentrações de espécies químicas. Conforme a Lei de Lambert-Beer, absorbância é inversamente proporcional à concentração da espécie absorvente.

As amostras podem ser colocadas em cubetas de vidro, plástico ou quartzo que apresentam duas faces polidas e duas opacas. Sobre o manuseio das cubetas, é importante segurá-las pelos lados bem polidos por onde passa a radiação.

Em medidas espectrofotométricas, os cálculos de concentração são baseados na Lei de Beer que estabelece que a absorbância é diretamente proporcional à concentração da espécie absorvente.

Para realizar uma medida espectrofotométrica, é preciso selecionar o melhor comprimento de onda λ onde haja mínima absorbância.

Análises espectrofotométricas que utilizam radiação na região do visível são chamadas colorimétricas. Portanto, para essas análises, é importante que as amostras sejam coloridas e não absorventes de radiação.